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FAQ

Généralités

Comment traiter les échantillons de selles et de sérum sanguin ?

Les échantillons de selles et de sang doivent être traités, dans la mesure du possible, dans les 60 minutes. Un stockage intermédiaire, par réfrigération ou congélation selon la matrice de l'échantillon, est possible. Voir à ce sujet : Conservation et manipulation

Après avoir ouvert le sachet en aluminium, je vois déjà des lignes colorées dans la zone de lecture. Le test est-il encore valable ?

Les lignes bleu clair sont importantes pour le contrôle qualité interne et peuvent également servir de lignes de repère à l'utilisateur (endroit où elles apparaissent). Elles disparaissent lors du lavage effectué pendant le test, sans avoir d'incidence sur celui-ci. Le test est valable.

La ligne de test (T) n'est que faiblement visible. Le test est-il positif ?

Oui, même une ligne T peu marquée est considérée comme un résultat positif. L'intensité de la ligne de contrôle (C) n'est pas liée à celle de la ligne de test.

Puis-je utiliser des tests qui ont été exposés à des températures extrêmes ?

En cas de suspicion d'exposition à une température hors de la plage 2-30 °C : vérifier à l'aide d'un échantillon de contrôle (si disponible) ou d'un tampon de migration. Ne pas utiliser en cas d'absence de la ligne C ou de comportement de migration atypique.

Quelle quantité de crottes dois-je utiliser ?

Seule la pointe du coton-tige doit être recouverte d'une fine couche de selles. Pour ce faire, homogénéisez l'échantillon de selles (à l'aide d'une spatule en bois, par exemple) et tamponnez-en la surface à au moins trois endroits avec la pointe du coton-tige. Une quantité excessive de selles peut bloquer le test ou donner à la zone de fond une teinte jaunâtre à brunâtre.

Combien de temps l'échantillon peut-il rester dans le tube tampon ?

5 minutes maximum. Mieux encore : bien mélanger la tête du coton-tige imprégnée de selles dans le tampon, puis appliquer la solution fraîche directement sur le test.

Puis-je mélanger des échantillons provenant de différentes sources (par exemple, des selles et de l'urine) ?

Non, les échantillons composites peuvent provoquer des réactions indésirables, car la composition des matrices des échantillons peut varier.

Puis-je humidifier le coton-tige avec du sérum physiologique avant de l'utiliser ?

Oui, c'est tout à fait possible, surtout lorsque les selles sont friables, et cela facilite grandement la tâche. La matière adhère ainsi mieux au coton-tige et s'applique plus facilement.

Stockage et manipulation

Si un dépistage différé s'avère nécessaire :

  • Conserver les selles au réfrigérateur (4–8 °C) pendant 3 jours maximum ; pour un stockage intermédiaire plus long, les congeler
  • Le sérum/plasma reste stable au frais jusqu’à 48 h ; pour un stockage intermédiaire plus long, le congeler
  • Le sang total est stable jusqu’à 48 h uniquement au frais ; la congélation n’est pas possible

Contrôle de la température :

  • Une température inférieure à 2 °C ou supérieure à 30 °C peut nuire aux performances du test et à l'effet tampon.
  • Les amener à température ambiante avant de commencer le test. Des tests trop froids peuvent entraîner l'apparition de lignes faibles ou retardées.

Durée de conservation de la solution tampon :

Une fois le flacon ouvert et le mélange effectué, utiliser dans les 30 minutes. Un liquide tampon périmé peut fausser les résultats du test.

Transport des échantillons :

Si les échantillons doivent être transportés, les conserver au frais afin de préserver la stabilité de l'antigène.

Remarques spécifiques concernant les échantillons

Prélèvements de sang total : à quoi faut-il faire attention ?

Pour éviter un débordement de sang total ou un blocage du test, attendez que le sang soit entièrement aspiré avant d'ajouter le tampon de coulée. C'est notamment dans le cas d'un sang très épais ou visqueux qu'un ajout prématuré peut perturber le test.

Échantillons hémolytiques, ictériques ou lipémiques :

Son utilisation peut entraîner une coloration de fond, ce qui peut compliquer l'interprétation et fausser les résultats. Les échantillons lipémiques peuvent influencer les résultats du test, car la graisse peut bloquer le couplage Ag/AK, ce qui peut entraîner des résultats faussement négatifs.

Échantillons contenant de la litière pour chat :

La litière traitée chimiquement présente dans le mélange échantillon-tampon peut fausser le résultat du test ; il convient donc d'éviter de prélever des échantillons dans des zones contaminées. Mieux vaut fendre l'échantillon de selles en deux et prélever l'échantillon dans la partie centrale.

Déroulement du test et problèmes d'exécution

Le test ne fonctionne pas ou se bloque :

Causes possibles : échantillon trop visqueux, quantité trop importante, présence de mucus ou d'impuretés.

Solution :

  • Échantillon de selles : tamponner la pointe du coton-tige uniquement en surface ; si nécessaire, ajouter quelques gouttes de tampon limpide.
  • Sérum : ne pas analyser d'échantillons hémolytiques, lipémiques ou ictériques.
  • Échantillons de sang total : laisser le temps au sang de s'imprégner complètement dans la zone de prélèvement avant d'ajouter le tampon. (Des retards peuvent survenir en cas de sang visqueux).

Liquide foncé et/ou trop visqueux dans le tube à échantillon :

Indique une quantité excessive de matières fécales. Diluer ou utiliser moins de produit pour permettre un écoulement propre et éviter l'apparition de traces brunes. Il est également possible de retourner le flacon tampon, de laisser les composants lourds se déposer au fond et de jeter la première goutte.

La ligne de test apparaît sans ligne de contrôle :

Le test n'est pas valide, veuillez le refaire. Vérifiez si l'échantillon présente des anomalies ou si vous constatez des anomalies pendant le déroulement du test.

Date du relevé :

Lire les résultats exactement dans le délai indiqué. Une lecture tardive entraîne souvent l'apparition de lignes d'ombre non spécifiques (artefacts d'évaporation !).

Lecture des résultats au-delà de 10 minutes :

  • Seules les lignes qui apparaissent ET persistent pendant la fenêtre de 10 minutes sont valides.
  • Les lignes qui disparaissent avant l'expiration du délai ou qui n'apparaissent qu'après 10 minutes ne doivent pas être prises en compte.

Remarques techniques

Problèmes fréquents liés aux tests antigéniques :

  • Le mélange échantillon-tampon est trop visqueux, ce qui rend difficile l'obtention d'un résultat net. Il convient donc de
    • Solution : ne pas plonger complètement la pointe du coton-tige dans les selles, mais tamponner superficiellement plusieurs endroits afin que seule la pointe soit recouverte.
  • Moment de prélèvement inapproprié : l'échantillon a été prélevé à un moment où la maladie n'est pas encore ou n'est plus détectable, par exemple le FeLV (antigènes détectables seulement 2 à 4 semaines après l'infection) ou le CPV/FPV (période d'excrétion très courte, environ 3 à 10 jours)
  • Test effectué immédiatement après un traitement : par exemple, les giardia mortes continuent d’être excrétées par l’animal pendant environ 3 semaines après un traitement. Les tests rapides ne font pas la distinction entre les giardia vivantes et mortes.
  • Les vaccins vivants, comme ceux contre le parvovirus, peuvent encore être détectés par le test antigénique jusqu'à 3 semaines plus tard.

Problèmes fréquents liés aux tests sérologiques :

  • Moment inapproprié pour le test : le délai de formation des anticorps après une infection peut varier en fonction de l'agent pathogène (cf. maladies des voyageurs)
  • Selon le vaccin (en particulier pour les vaccins vivants), ne pas effectuer le test immédiatement ! La séroconversion prend du temps (généralement 3 à 4 semaines après la dernière dose).

Sensibilité, spécificité et performance globale du test (TTP) :

  • Sensibilité : capacité à identifier correctement les animaux malades comme positifs.
  • Spécificité : capacité à identifier correctement les animaux sains comme négatifs.
  • TTP : fiabilité globale du test, tenant compte de la sensibilité et de la spécificité.

Types d'échantillons et restrictions

Éviter de mélanger différentes matrices d'échantillons :

  • Fèces + urine ou autres substances → réactions inattendues, test perturbé.

Types d'échantillons particuliers :

  • Lipémique, hémolytique ou ictérique : peut accentuer la coloration de fond et/ou perturber l'écoulement, ce qui rend l'interprétation plus difficile.
  • Selles friables ou très friables : humidifier le tampon pour prélever la matière à l'aide d'un coton-tige.

Substances étrangères :

Litière pour chat, particules de litière ou restes de nourriture → résultat faussé. Utiliser systématiquement des échantillons de selles propres.

Informations complémentaires à l'intention des propriétaires d'animaux / du cabinet vétérinaire

Porteurs chroniques :

  • Certains animaux (Giardia, parvovirus, FeLV) peuvent excréter des antigènes ou des anticorps pendant une période prolongée ou de manière intermittente.
  • L'interprétation peut nécessiter, le cas échéant, plusieurs tests effectués à intervalles réguliers.

Rendez-vous de vaccination ou dépistage :

  • Après l'administration d'un vaccin vivant, le test antigénique peut donner un résultat temporairement positif.
  • Délai d'attente après une vaccination par un vaccin vivant : tests antigéniques (par ex. parvovirus) : au moins 2 à 3 semaines ; tests sérologiques : environ 2 à 4 semaines, selon le vaccin.

Informations sur les zoonoses :

  • Cryptosporidies ou Giardia → L'homme peut également être infecté. Respecter les règles d'hygiène.

Prélèvement d'échantillons et manipulation

Causes possibles du fait que le test ne s'exécute pas ou que son exécution est bloquée :

  • Il arrive souvent que les micropores de la membrane en nitrocellulose soient obstrués ou qu'une quantité excessive de matières fécales ait été déposée sur la zone d'échantillonnage. Remarque : certains tampons d'échantillonnage sont plus épais et ont plus de mal à filtrer les échantillons visqueux ou les quantités excessives de matière.

Homogénéisation de l'échantillon :

  • Pour les échantillons de selles, il est recommandé d'homogénéiser brièvement l'échantillon avant de le prélever (par exemple à l'aide d'une spatule en bois)
  • Avantage : cela augmente la probabilité de détecter effectivement les antigènes présents dans l'échantillon.

Quantité de l'échantillon :

  • Une quantité excessive de mélange selles/tampon peut fausser la ligne de test et/ou entraver le déroulement du test ; une quantité insuffisante peut entraîner des résultats faussement négatifs.
  • Conseil : humidifiez toujours l'extrémité du coton-tige, ne l'immergez pas entièrement.

Comment gérer des selles très liquides ou aqueuses :

  • En cas de diarrhée très liquide, le virus ou l'antigène peut être éliminé → le test est d'abord négatif, bien qu'il y ait infection.
  • Solution : après une diarrhée liquide, attendre 30 minutes et utiliser des selles plus solides (→ effet de dilution).

Prévention de la contamination :

  • Utiliser des gants, veiller à la propreté des récipients contenant les échantillons.
  • Une contamination croisée (par exemple entre animaux) peut entraîner des résultats faussement positifs.

Interprétation des résultats

Lignes de test peu nettes :

  • Les lignes T faibles, mais visibles pendant la période d'interprétation, sont considérées comme positives. En cas de ligne faible et d'absence de suspicion clinique : envisager de répéter le test et/ou de recourir à un examen de confirmation (par exemple, PCR, Western blot).
  • L'intensité de la ligne de contrôle n'a aucune influence ni aucune importance pour la ligne de test.

Combinaison des résultats des tests :

  • En cas de suspicion d'infection chronique ou récidivante, il peut être judicieux, par mesure de précaution, de réaliser des tests de dépistage d'agents pathogènes différentiels (par exemple : Giardia et CPE ou Giardia et Cryptosporidium).
  • Exemple : Giardia ou parvovirus – un test individuel négatif ne signifie pas nécessairement « absence d'agent pathogène ».

Date du test :

  • De nombreux tests antigène/anticorps ont des fenêtres temporelles spécifiques pendant lesquelles l'infection est détectable.
    • Par exemple, l'antigène du parvovirus : période d'environ 7 à 10 jours, excrétion du virus 3 à 4 jours après l'infection et avant l'apparition des symptômes
    • Exemple : antigène du virus de la maladie de Carré : détectable dans le sang pendant 3 à 4 jours, puis dans les selles pendant environ 3 jours après
  • Tests effectués trop tôt → résultats faussement négatifs.
  • Tests effectués trop tard (par exemple après l'excrétion du virus) → également des résultats faussement négatifs.

Tests de contrôle :

  • Particulièrement utile après un traitement ou une vaccination pour suivre l'évolution.
  • Mais attention : les vaccins à virus vivants peuvent être détectés par les tests rapides (par exemple, l'antigène du parvovirus après vaccination). Respectez le délai d'attente !

Conseils pour les prélèvements de selles

  • Ne plonger que la pointe du coton-tige (le tiers avant de la tête du coton-tige) dans les selles
  • Une fois les selles homogénéisées, prélever un échantillon superficiel à au moins trois endroits
  • Éviter les suspensions trop épaisses (dues par exemple à du mucus ou à d'autres impuretés), sinon les micropores de nitrocellulose se bouchent
  • Si des particules grossières devaient malgré tout pénétrer dans le flacon de tampon : retourner le flacon, laisser les particules grossières se déposer au fond et jeter la première goutte.
  • Si le test s'enlise, ajouter si nécessaire quelques gouttes de tampon clair ou répéter le test.